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熒光定量Q-PCR檢測的取樣及運(yùn)輸須知
更新時(shí)間:2019-03-07   點(diǎn)擊次數(shù):1740次
   熒光定量Q-PCR檢測的取樣及運(yùn)輸須知
  熒光定量Q-PCR檢測是利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的關(guān)系對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析。
  它的擴(kuò)增曲線反應(yīng)了Q-PCR動(dòng)態(tài)進(jìn)程的曲線。
  熒光閾值:前15個(gè)循環(huán)信號(hào)作為熒光本底信號(hào),熒光閾值的默認(rèn)設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍,如果手動(dòng)設(shè)置則設(shè)置大于熒光背景值和陰性對(duì)照的熒光高值,進(jìn)入指數(shù)期的初階段。
  CT值:PCR擴(kuò)增過程中,擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)。
  Q-pcr的取樣及運(yùn)輸事項(xiàng):
  一、細(xì)胞收集及保存
  1.貼壁細(xì)胞胰酶消化后900轉(zhuǎn)5min離心至管底(非貼壁細(xì)胞直接離心),棄上清,將細(xì)胞凍存與-80度長期保存,-20度,暫時(shí)保存。若用于Q-PCR盡量使用滅菌無RNA酶離心管,RNA樣本保存液中-80度長期保存。
  2.組織樣本取樣后立即-80或者液氮保存。后續(xù)用于Q-PCR的取樣后立即存于液氮或者-80度環(huán)境中,或者放于有RNA樣本保存液的滅菌無RNA酶離心管中-80度保存。
  二、樣本運(yùn)輸
  短時(shí)2h左右冰袋或者液氮運(yùn)輸,干冰(干冰可以維持-70度)密封運(yùn)輸。
  三、樣本編號(hào)
  樣本標(biāo)號(hào)清晰,須提供樣本清單。
  病理實(shí)驗(yàn)取樣及實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
  1.動(dòng)物組織提取后(玉米粒大小即可)迅速保存于4%多聚甲醛中固定,管體標(biāo)號(hào),組織塊盡量少帶血液,或可以用多聚甲醛將樣本稍作清洗,常溫保存,常溫運(yùn)輸。做電鏡的樣本由2.5%戊二醛固定于15ml離心管內(nèi),樣本直徑小于2mm,常溫保存常溫運(yùn)輸。
  2.細(xì)胞樣本制作成爬片后PBS浸潤保存與細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi),密封常溫運(yùn)輸。做電鏡的細(xì)胞離心收集好后2.5%戊二醛固定,常溫運(yùn)輸。
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